DNA的粗提取与鉴定实验

实验目的

学会粗提取植物细胞 DNA 的方法，并用二苯胺试剂鉴定 DNA。

实验原理

DNA 不溶于酒精，而细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可借此将二者分离；DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，在 2 mol/L 的 NaCl 溶液中能溶解。洗涤剂能瓦解细胞膜。在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺会被染成蓝色，可作为鉴定依据。

实验器材

• 新鲜洋葱（或其他植物材料）
• 研磨液（洗涤剂和食盐）
• 体积分数 95% 的酒精（预冷）
• 2 mol/L NaCl 溶液
• 二苯胺试剂
• 研钵、纱布或滤纸、烧杯
• 试管、玻璃棒、水浴装置

实验步骤

1. 取洋葱切碎，加入研磨液充分研磨成匀浆。
2. 过滤（或离心），取滤液备用。
3. 向滤液中沿杯壁缓缓加入预冷的 95% 酒精，静置后用玻璃棒搅拌，卷出白色丝状物。
4. 将丝状物放入 2 mol/L NaCl 溶液中溶解。
5. 加入二苯胺试剂，混匀后沸水浴加热数分钟，观察颜色。
6. 另设只含 NaCl 溶液和二苯胺试剂的对照管，对比颜色。

实验现象与结论

加入预冷酒精后，溶液中析出白色丝状物，即粗提取的 DNA。溶解后加二苯胺试剂并沸水浴加热，溶液变蓝，对照管不变蓝。结论：提取物含有 DNA，DNA 不溶于酒精，可与溶于酒精的杂质分离。

注意事项

• 沸水浴加热时注意防烫，试管口勿对人。
• 酒精远离明火。
• 二苯胺试剂有毒，避免接触皮肤。

常见问题

为什么要用预冷的酒精析出 DNA？

低温酒精能抑制核酸水解酶的活性，防止 DNA 降解，并能使 DNA 析出得更充分。

鉴定 DNA 时为什么要沸水浴加热？

DNA 在沸水浴加热条件下与二苯胺反应才能呈现蓝色，不加热则不显色或颜色很浅。