明场、暗场与相差显微镜对比

实验目的

比较三种观察方式的成像特点,理解各自适用的标本类型。

实验原理

明场依靠标本对光的吸收差异成像,染色标本反差好,透明标本反差低。暗场只让标本散射的光进入物镜,背景暗、轮廓亮。相差装置把光通过标本时产生的相位差转换为明暗差异,可观察未染色的活细胞。

实验器材

• 未染色的透明标本
• 染色标本
• 明场观察模式
• 暗场观察模式
• 相差观察模式

实验步骤

1. 先选明场模式,观察未染色标本并记录反差
2. 调节亮度和焦距,再观察染色标本做对比
3. 切换到暗场模式,观察背景和标本轮廓
4. 切换到相差模式,观察细胞内部结构的明暗
5. 比较三种方式下同一标本的差别

实验现象与结论

明场下未染色透明标本反差很低,轮廓不清晰;暗场下背景黑暗,标本轮廓明亮突出;相差下细胞核、细胞边缘等结构的明暗对比增强。染色标本在明场下反差较好。说明应根据标本特点选择合适的观察方式。

常见问题

观察活细胞为什么常用相差显微镜?

活细胞多为透明,明场反差低。相差显微镜可把相位差转为明暗差,无需染色就能看清结构。

暗场下为什么背景是黑的?

暗场只让标本散射的光进入物镜,没有标本的位置没有光进入,所以背景呈黑色。