单克隆抗体的制备

实验目的

理解单克隆抗体制备的过程，明白细胞融合和两次筛选的作用。

实验原理

B淋巴细胞能产生特异性抗体但不能无限增殖，骨髓瘤细胞能无限增殖但不产生特异性抗体。两者融合得到的杂交瘤细胞兼具两种特点。先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，再通过克隆化培养和抗体检测，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

实验器材

• 特定抗原
• 小鼠
• B淋巴细胞（取自免疫小鼠脾脏）
• 骨髓瘤细胞
• 促融剂（如PEG、灭活病毒）
• 选择培养基
• 动物细胞培养设备

实验步骤

1. 给小鼠注射特定抗原，使其产生免疫反应。
2. 从小鼠脾脏中取出已免疫的B淋巴细胞。
3. 用促融剂诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。
4. 用选择培养基筛选出杂交瘤细胞。
5. 克隆化培养并做抗体检测，选出能分泌所需抗体的细胞。
6. 体外培养或注入小鼠腹腔培养，提取单克隆抗体。

实验现象与结论

融合后的混合细胞中，未融合的细胞和同种细胞融合的细胞在选择培养基上不能长期存活，只有杂交瘤细胞能增殖。再经抗体检测，选出的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌针对特定抗原的单一抗体。

注意事项

• 动物实验须遵守伦理和学校的管理规定。
• 细胞培养全程无菌操作。

常见问题

单克隆抗体制备中为什么要进行两次筛选？

第一次筛出杂交瘤细胞，第二次经克隆化培养和抗体检测筛出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

单克隆抗体有什么优点？

特异性强、灵敏度高，并可大量制备。