制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

实验目的

学会配制牛肉膏蛋白胨固体培养基，掌握灭菌和倒平板的无菌操作要点。

实验原理

培养基一般含碳源、氮源、水和无机盐，满足微生物生长所需。牛肉膏、蛋白胨主要提供碳源、氮源等，NaCl 提供无机盐，琼脂是凝固剂，一般不被微生物分解利用。高压蒸汽灭菌（约121 ℃）能杀死培养基中的全部微生物，包括芽孢。

实验器材

• 牛肉膏
• 蛋白胨
• NaCl
• 琼脂
• 蒸馏水
• 天平和称量纸
• 锥形瓶、玻璃棒
• 高压蒸汽灭菌锅
• 培养皿
• 酒精灯

实验步骤

1. 按配方计算并称量牛肉膏、蛋白胨、NaCl，溶于蒸馏水。
2. 加入琼脂，加热并搅拌至完全溶化，再补足水量。
3. 按要求调节 pH（培养细菌一般调至近中性）。
4. 塞好瓶口，放入高压蒸汽灭菌锅，121 ℃ 灭菌 15～30 min。
5. 待培养基冷却至 50 ℃ 左右，在酒精灯火焰旁倒平板。
6. 平板冷却凝固后，将培养皿倒置存放。

实验现象与结论

灭菌后的培养基冷却到约 50 ℃ 时仍是液态，倒入培养皿后逐渐凝固成半透明的固体平板。倒置存放可避免皿盖上的冷凝水滴落到培养基表面造成污染。无菌操作规范时，空白平板培养后表面无菌落，说明灭菌和倒平板成功。

注意事项

• 高压灭菌锅按规程使用，降压后再开盖。
• 溶化琼脂要不断搅拌，防止糊底或溢出。
• 倒平板时远离易燃物，注意火焰和烫伤。

常见问题

为什么培养基冷却到 50 ℃ 左右才倒平板？

约 50 ℃ 时培养基仍为液态且不烫手，皿盖冷凝水也较少；温度过低琼脂会提前凝固。

平板制好后为什么要倒置？

倒置可防止冷凝水落到培养基表面，避免菌落连成一片或造成污染。