平板划线法分离微生物

实验目的

掌握平板划线法的无菌操作，理解通过划线获得单菌落的原理。

实验原理

接种环蘸取菌液后在培养基表面连续划线，菌体随划线不断被稀释，使聚集的菌种逐步分散。划到后面的区域时，微生物往往以单个细胞的形式分布，培养后每个细胞繁殖形成一个肉眼可见的菌落，从而得到纯培养物。

实验器材

• 已灭菌的固体培养基平板
• 菌种（菌液或斜面）
• 接种环
• 酒精灯
• 恒温培养箱
• 记号笔

实验步骤

1. 在酒精灯火焰上灼烧接种环至烧红，冷却后蘸取菌液。
2. 在火焰旁打开皿盖一条缝，在平板一端轻轻划3～5条平行线。
3. 灼烧接种环并冷却，从上一区域末端开始，向新区域划线。
4. 重复上一步，每次划线前都灼烧接种环；最后一区不与第一区相连。
5. 划线结束后再灼烧接种环，盖好皿盖，将平板倒置。
6. 放入恒温培养箱中培养，观察菌落分布。

实验现象与结论

培养后，第一区域菌落密集甚至连成一片，越靠后的区域菌落越稀疏，最后一个区域可见彼此分开的单菌落。挑取单菌落可获得纯培养物。若接种环未冷却，高温会杀死菌体，导致后面区域无菌落生长。

注意事项

• 使用酒精灯要远离易燃物，防止火灾。
• 接种环灼烧后须冷却再蘸菌，以免烫死菌体。
• 划线力度要轻，避免划破培养基。
• 培养后的平板按规定灭菌处理。

常见问题

平板划线法中接种环为什么要多次灼烧？

每次划线前灼烧可杀死上次残留的菌体，使下一区域的菌来自上一区域末端；结束后灼烧可防止污染环境。

为什么最后一个区域不能与第一个区域相连？

第一区域菌体最密集，相连会把大量菌体带入末区，影响单菌落的形成。